Die neue TMG-Proteinfamilie : rekombinante Proteinsynthese und Ligandensuche ; A new TMG-protein-family
Philipps-Universität Marburg, 2010
Hochschulschrift
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This graduation work revises the TMG protein family. The aim was to identify a blood component as binding partner. The TMG proteins were cloned and modified to gain the extracellular protein domains. Purificated proteins were used for SPR and flow cytometry assays. ; Das Thema der Arbeit, die Identifikation eines möglichen Interaktionspartners für eine neue Familie γ-carboxylierter Proteine, wurde umfangreich untersucht. Für die erforderte Ligandensuche wurden zuerst verschiedene Proteinkonstrukte erfolgreich in humanen Nierenzellen (HEK293-Zellen) exprimiert. Die Proteinexpression erforderte obligatorische Modifikationen der Proteinsequenz, um stabile und potentiell funktionsfähige Moleküle zu erhalten. Die Expression der Ektodomäne als Albuminfusion war ein Novum. Es wurden sowohl modifizierte Fusionsproteine exprimiert, als auch nicht modifizierte, native, membranständige Gla-Proteine. Die Reinigungsentwicklung orientierte sich an etablierten Reinigungsverfahren γ-carboxylierter Proteine. Das Reinigungsverfahren erzielte eine ausreichende Reinheit der gewünschten Proteinsequenz und die enthaltene Fraktion der Gla-FP war zu 95% γ-carboxyliert. Die γ-Carboxylierung war das wichtigste Kriterium für die potentielle Funktionsfähigkeit der Ektodomänen. Die Familie der membranständigen Gla-Proteine besitzt eine Ektodomäne, welche mit dem Gefäßsystem des Menschen in Kontakt steht. Die Ligandensuche erfolgte deshalb im humanen Plasma. Mit vielfältigen Methoden wurde versucht Liganden für die Gla-Proteine zu finden. Die Suche nach diesem erfolgte durch Bindungsassays auf zellulärer und plasmatischer Ebene. Es wurden Bindungsassays mit SPR-Methoden als auch Identifizierungversuche mit Magnetic Beads in Kombination mit Massenspektrometrie durchgeführt. Die zellulären Assays basierten auf der Annahme, dass kein Bindungspartner im Plasma identifiziert werden konnte. Die Hauptzellarten des Blutes, Erythrozyten, Thrombozyten und Leukozyten, wurden untersucht. Mit Thrombozyten zeigten sich gerinnungsähnliche Vorgänge, welche ...
Titel: |
Die neue TMG-Proteinfamilie : rekombinante Proteinsynthese und Ligandensuche ; A new TMG-protein-family
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Autor/in / Beteiligte Person: | Schürmann, Daniel ; Keusgen (Prof. Dr. ) |
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Veröffentlichung: | Philipps-Universität Marburg, 2010 |
Medientyp: | Hochschulschrift |
DOI: | 10.17192/z2010.0122 |
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